İnsan retina pigment epiteli hücre kültüründe (ARPE-19) anti-VEGF ilaçların(bevacizumab, ranibizumab, aflibercept) sitotoksisite derecelerinin belirlenmesi ve oluşturdukları oksidatif stresin total antioksidan kapasite çalışılarak ölçülmesi
Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sağlık Bilimleri Üniversitesi, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SHARGIYYA BAYRAMOVA
Danışman: Nil İrem UÇGUN ZEKİ FİKRET
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç:Anti-VEGF etkili ilaçlardanAflibercept, Ranibizumab, Bevacizumab'ın ARPE-19(İnsanRetina Pigment Epiteli) hücre kültürlerinde sitotoksisite derecelerinin, total antioksidan kapasite(TAK) velipid peroksidasyonu düzeylerine etkisinindeğerlendirilmesidir. Materyal Metod: Deneylerde kullanılan insan retina pigment epiteli (ARPE-19) hücr kültürü ticari olarak satın alındı. Hücreler uygun besiyeri (DMEM/HAM F-12) karışımı ile kültür flasklarına ekilerek inkübatöre konuldu. Hücreler çoğalarak yeterli sıkışıklığa ulaştığı zaman tripsin-EDTA solusyonu kullanılarak flasklardan söküldü. Elde edilen hücrelerin bir kısmı freezing medium içinde kriyovallere konuldu. Kriyovaller -80 º C'de dondurulduktan sonra sıvı azot tankına aktarılarak saklandı. Eşit sayıda hücreler olan flasklara anti-VEGF ilaçlar; Ranibizumab (1x, 2x, 4x), Bevacizumab (1x, 2x, 4x), Aflibercept (1x,2x,4x) farklı dozlarda mediumlara eklenerek 24 saat bekletildi. Uygulanan dozlar klinik uygulamada vitreusa uygulanan doz baz alınarak hesaplandı. Kontrol grubu (ARPE-19 hücreleri ve medium) ile farklı ilaç dozları uygulanan hücre kültürü gruplarının toksititesi MTT testi ile 570 nm dalga boyunda spektofotometrik metodla ELISA plak okuyucuda değerlendirildi. Hücre gruplarında anti-VEGF ilaçların oluşturdukları oksidatif stresin total antioksidan kapasite ölçümü hazırlanan hücre lizatlarında TAK kiti(Real Assay,Baran Med.) kullanılarak spektrofotometre yöntemi ile ELISA biyookuyucuda 570 nm dalga boyunda okutularak değerlendirildi. Anti-VEGF ilaçların etkisine maruz kalan hücre gruplarından alınan lizatlarda lipid peroksidasyon göstergesi Malondialdehid (MDA) düzeyi ELISA biyookuyucuda 450 nm dalga boyunda spektrofotometrik yöntemle ölçüldü. Bulgular:Kontrol grubu ile anti-VEGF ilaçlar uygulanan ARPE-19 hücre gruplarının toksisite düzeyleri arasında istatistiksel olarak anlamlı fark olduğu saptandı. Aflibercept ve Ranibizumab'ın0.05 ml (1x) dozu uygulanan hücre grupları ile kontrol grubundakihücre canlılığı karşılaştırıldığında kontrol grubunda yüksek hücre canlılığı saptandı (p=0.002). Bevacizumab'ın 0.05 ml (1x) dozunda hücre canlılığını etkilemediği saptandı (p=0.002). Aflibercept (2x=4mg/0.1ml), Bevacizumab (2x=2.5mg/0.1ml), Ranibizumab (2x=1.15mg/0.1ml) dozları uygulanan hücre gruplarında kontrol grubu ile kıyasla hücre canlılığında istatistiksel olarak önemli azalma saptandı (p=0.001). Kontrol grubu ile kıyasla Aflibercept (4x=8mg/0.2 ml), Bevacizumab (4x=5mg/0.2ml), Ranibizumab(4x=2.3mg/0.23ml) ilaç dozları uygulanan hücre gruplarında canlılık düzeyinde azalma saptandı (p=0.001). 0.05 ml anti-VEGF ilaçlara maruz kalan hücre grubu ile kontrol grubunun Total Antioksidan Kapasite düzeyleri arasında istatistiksel olarakanlamlı fark saptanmadı (p=0.169). Lipid peroksidasyonu düzeyleri malondialdehit (MDA) kontrol grubunda anti-VEGF ilaç uygulanan gruba kıyasla istatistiksel olarak anlamlı düşük saptandı (p=0.001). Sonuç: Çalışmamız sonucunda anti-VEGF etkili ilaçlardan; Aflibercept'in 1x, 2x, 4x dozlarında, Ranibizumab'ın 1x,2x,4x dozlarında, Bevacizumab'ın 2x, 4x dozlarında ARPE-19 hücre kültürü gruplarında hücre canlılığını azalttığı, proliferasyonu engellediği saptandı. İlaçların 0.05 ml dozunda hücre kültüründe total antioksidan kapasite düzeyini değiştirmediği, fakat lipid peroksidasyon ürünü olan malondialdehid düzeyini arttırdığı saptanmıştır. Bevacizumab'ın klinik uygulama dozunda (1x=0.05ml) hücre canlılık ve proliferasyon oranını değiştirmediği izlenmiştir. Anahtar kelimeler:ARPE-19 Hücreleri, Aflibercept, Ranibizumab, Bevacizumab, Malondialdehit, Total Antioksidan Kapasite, Oksidatif Stres