Ratlarda doxorubicinle oluşturulan böbrek hasarı modelinde, rat mezenkimal kök hücre mitokondrisi transplantasyonu tedavisinin etkinliğinin ortaya konması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sağlık Bilimleri Üniversitesi, GÜLHANE SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, FİZYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: GÖKHAN BURÇİN KUBAT
Danışman: Mehmet ÖZLER
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Çalışmada ağırlıkları 300-350 gram ağırlığında 42 adet Sprague-Dawley cinsi erkek rat kullanıldı. Ratlar 4 gruba ayrıldı: 1.grup sham grubu, 2.grup Doxorubicin ile nefrotoksisite oluşturacak grup, 3. grup Doxorubicin ile nefrotoksisite oluşturulan mitokondri transplantasyonu yapılan tedavi grubu, 4. grup ise Doxorubicin ve Respiration buffer uygulanan gruptur. Mitokondri transplantasyonu için Rat mezenkimal kök hücre kültürü yapıldı. Daha sonra mitokondri izolasyonu yapıldı. Mitokondri membran potansiyelini göstermek için Mitotracker RED CMXROS ile immünofloresan yöntem kullanıldı. İzole edilmiş mitokondrinin metabolik aktivitesini belirlemek için ATP Assay ölçümü yapıldı. Mitokondri transplantasyonu için, 2x107 rat mezenkimal kök hücresinden mitokondri izolasyonu yapıldı. Doxorubicin+mitokondri grubunda her iki böbreğe bu transfer işleminde yaklaşık 8 milyon mitokondri 500 µl. içinde uygulandı. Histolojik analizler için hematoksilen-eosin boyaması yapıldı. Biyokimyasal analizler için alınan kan örneklerinden üre, kreatin ve BUN analizleri, idrar örneklerinden proteinüri analizleri yapıldı. Alınan böbrek dokusu örneklerinde oksidan-antioksidan dengeyi ortaya koymak üzere MDA (Malondialdehit), SOD (Superoksit dismutaz), GPx (Glutatyon peroksidaz) analizleri yapıldı. Mezenkimal kök hücrelerde mitokondrinin membran bütünlüğü için 5x104 hücre sayılması sonucunda %99,39' luk kısmının membran bütünlüğünü koruduğu gözlemlenmiştir. Mezenkimal kök hücreden mitokondri izolasyonu sonrasında %46,30'luk kısımda mitokondrilerin membran bütünlüğünü koruduğu gözlemlenmiştir. Histolojik analizlerde, sham grubunda hiçbir böbrek hasarı gözlemlenmedi. Doxorubicin grubu, Doxorubicin+respiration buffer grubu ve Doxorubicin+mitokondri gruplarında Doxorubicin enjeksiyonundan sonra tübüler dilatasyon ve tübüllerde protein birikimi gözlemlendi. 5. gunde mitokondri transplantasyonundan sonra Doxorubicin+mitokondri grubunda tübüler protein birikimi anlamlı oranda azaldı. Asıl önemli nokta ise Doxorubicin+mitokondri grubunda transplantasyondan sonra tübüler hücrelerde anlamlı şekilde rejenerasyon bulundu. Üre, Kreatin ve BUN ölçümünden elde edilen sonuçlarda Sham grubu, Doxorubicin grubu, Doxorubicin+respiration buffer grubu ve Doxorubicin+mitokondri gruplarındaki değişimler istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar bulunamadı. Proteinüri ölçümünden elde edilen sonuçlara göre Sham grubunda bir değişiklik gözlemlenmedi. Doxorubicin grubu, Doxorubicin+respiration buffer grubu ve Doxorubicin+mitokondri gruplarında doxorubicin enjeksiyonundan sonra ilk beş günde tüm ratlar 3+ proteinüri değerine ulaştı. Doxorubicin+mitokondri grubunda beşinci günde mitokondri transplantasyonundan sonra anlamlı azalma bulundu. MDA ölçümünden elde edilen sonuçlarda Sham grubu, Doxorubicin grubu, Doxorubicin+respiration grubu ve Doxorubicin+mitokondri gruplarındaki değişimler istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar bulunamadı. SOD enzim seviyesi ölçümlerinde elde edilen sonuçlara göre Sham grubuna göre Doxorubicin+mitokondri grubunda istatistiksel olarak anlamlı derecede artış bulundu. Yine Doxorubicin grubuna göre Doxorubicin+mitokondri grubunda istatistiksel olarak anlamlı derecede artış bulundu. Diğer çalışma gruplarında ölçülen değerler arasında anlamlı bir farklılık bulunamadı. GPx enzim seviyesi ölçümlerinde elde edilen sonuçlara göre Sham grubuna göre Doxorubicin+mitokondri grubunda istatistiksel olarak anlamlı derecede artış bulundu. Yine Doxorubicin grubuna göre Doxorubicin+mitokondri grubunda istatistiksel olarak anlamlı derecede artış bulundu. Diğer Çalışma gruplarında ölçülen değerler arasında anlamlı bir farklılık bulunamadı. Bu sonuçlara göre mitokondri transplantasyonunun böbrek hasarı hastalıklarında tedavi edici özelliği dikkat çekmiştir. Bu tedavi yönteminin hücresel ya da mitokondriyal hasara neden olan diğer hastalıklarda kullanılabileceği öngörülmektedir. Anahtar kelimeler: Doxorubicin, böbrek hasarı, rat, mezenkimal kök hücre, mitokondri transplantasyonu